High-Resolution Melting Analysis에 의한 Duffy 혈액형군 유전형 분석

Abstract

배경: Duffy 혈액형 항원에 대한 항체는 용혈성수혈부작용과 신생아용혈성질환을 일으키므로정확한 Duffy 혈액형 검사가 중요하다. 저자들은빠르고 경제적인 high-throughput이 가능한 새로운 high resolution melting (HRM) 분석법에 의한Duffy 유전형 검사를 평가하고자 하였다. 방법: 20개의 한국인 혈액 검체와 GATA 대조로써 흑인 검체 한 개에 대하여 다이아메드사의적혈구응집검사로 표현형을 확인하였고, Taq DNA polymerase와 BanI, StyI 효소를 사용하여 중합효소연쇄반응-제한절편길이다형성(PCR-RFLP) 검사를 시행하였다. HRM 분석을 위해 LightCycler 480 ResoLight Dye (Roche, USA)과 Lightcycer 480 (Roche, USA)으로 PCR 증폭을 시행하였다. 결과: 혈청학적 표현형과 PCR-RFLP와 HRM에의한 유전형 검사 결과를 비교하였다. HRM 분석결과, Duffy 유전형인 FYA/FYA, FYB/FYB, FYA/ FYB에 따라, 또한 GATA 유전자변이인 FYB-33T (T/T) 동형접합체, FYB-33T/33C (T/C) 이형접합체, FYB-33C (C/C) 동형접합체에 따라 HRM 곡선은 서로 다른 양상을 보였다. 표현형 검사 결과Fy(a＋b−) 18건, Fy(a＋b＋) 1건, Fy(a−b＋) 1건및 Fy(a−b−) 1건이 확인되었고 이는 두 가지 유전형 검사와 모두 일치하였다. Fy(a−b−) 검체는두 가지 유전형 검사법 모두에서 FYB-33C 동형접합체로 동일하였다. 결론: 혈청학적 표현형과 유전형 검사는 좋은일치율을 보였고 PCR-RFLP와 HRM에 의한 두가지 유전형 검사는 GATA와 Duffy 코딩부위 유전자 변이를 찾아내는 데에 동일한 결과를 보였다. HRM 분석법은 Duffy 유전자형의 high-throughput 선별검사로서 적합하며 신뢰할 수 있는 검사로 사료된다.